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免疫組化中抗體選擇要求

1、一抗選擇要點

（1）選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標明確地與單一特異抗原決定簇結合，另一方面，即使是同一個抗原決定簇，在機體內也可以由好幾種克隆產生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對較低；而多克隆抗體特異性稍弱，抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等有所避免）。

（2）種屬來源。一般家兔來源的抗體多是多克??；而小鼠來源的抗體多是單克隆，但也有另外。這條主要要與后面的二抗來源相匹配。

（3）實驗目的是檢測什么種屬的抗原，即species reactivity。這一點很重要，一般說明書上都有注明，如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。

（4）能否做免疫組化。一般一抗說明書都會注明做WB、IHC、ICC、IF等，建議選擇注明的抗體，因為一般都是經過文章證明。

（5）檢測標本類型。用于檢測石蠟切片還是冰凍切片，一般能做石蠟切片的抗體，可能都可以用來檢測冰凍切片，但能做冰凍切片的抗體，不一定能檢測石蠟切片中的抗原。

（6）生產廠家。我的經驗是國外抗體生產商原裝抗體質量一般沒問題，但有點貴；而國內分裝廠家用的一抗工作液，價格便宜，但有時結果的穩(wěn)定性和重復性稍差，尤其不同批次重復性較差。

（7）價格與質量的矛盾。我個人認為一抗原裝質量可能會好點，因為許多一抗避免反復凍融，且在稀釋液中穩(wěn)定性較差（若時間長），但價格較貴。

2、二抗選擇要點

（1）種屬來源。主要根據一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗，以與后面的SP結合反應；而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。這主要與后面有無三抗和三抗種類有關。

（3）選擇IgM還是IgG。一般一抗是IgM，那么二抗就選擇IgM；反之，一抗是IgG，則二抗選擇IgG。